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Methyl Target測序技術(shù)方案 

      甲基化是基因組中非常重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記信息，參與了包括基因調(diào)控、生物發(fā)育、疾病等眾多的生理和病理過程，在大多數(shù)癌癥中都廣泛發(fā)現(xiàn)甲基化水平的異常。除了對(duì)于全基因組甲基化水平的觀察與研究，對(duì)于眾多目的候選基因的甲基化水平的研究則是更為具有針對(duì)性和打樣品可行性的方案，但是由于傳統(tǒng)的Sanger測序通量和費(fèi)用的限制，這一方案一直停留在較小的研究規(guī)模上?，F(xiàn)在天昊生物結(jié)合目的區(qū)域富集和二代測序技術(shù)推出了自主研發(fā)的目的候選基因區(qū)域甲基化水平測序技術(shù)——Methyl Target^TM，這一技術(shù)不僅大大提高了數(shù)據(jù)通量，同時(shí)大幅度降低了研究費(fèi)用。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

      檢測精度高：單堿基分辨率，精確分析每一個(gè)C堿基的甲基化狀態(tài)；

      效率高，耗時(shí)少：借助二代測序高通量測序平臺(tái)，對(duì)甲基化信息進(jìn)行高效掃描；

      性價(jià)比高：相對(duì)于傳統(tǒng)Sanger測序方法，費(fèi)用少。

      高質(zhì)量的引物設(shè)計(jì)：運(yùn)用公司的生物信息學(xué)平臺(tái)快速、高質(zhì)量地設(shè)計(jì)每一個(gè)引物，保證每個(gè)區(qū)域的富集質(zhì)量。

      高準(zhǔn)確性：我們充分運(yùn)用Miseq 2×300bp的測序長度和成熟的生物信息學(xué)分析手段，對(duì)每一個(gè)堿基進(jìn)行分析矯正，保證每個(gè)堿基都能表達(dá)出最真實(shí)的甲基化信息。

技術(shù)路線

      1.DNA質(zhì)檢：Nanodrop儀器定量結(jié)合凝膠電泳檢測。

      2.樣本要求：樣品需求量：≥1μg；樣品純度：OD260/280=1.7-2.0；樣本無明顯降解。

      3.文庫構(gòu)建：Bisulfite Treatment——樣本目標(biāo)片段多重PCR反應(yīng)——相同樣本的多重PCR反應(yīng)體系混合——樣本添加特異性標(biāo)簽序列——定量后上機(jī)測序。

      4.上機(jī)測序：Illumina Miseq 2×300bp測序。

      5.生物信息學(xué)分析。